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堿性磷酸酶(低比活)
對硝基苯磷酸二鈉 + H2O ———→對硝基苯酚 + NaH2PO4
一、 產(chǎn)品介紹
外 觀(guān): | 無(wú)色或淺紅色溶液 |
蛋白比活: | ≥300U/mg protein。建議作為 ALP 質(zhì)控品或校準品,不適合標記抗體。 |
純 度: | ≥80% by SDS-PAGE。 |
穩 定 性: | 2-8℃至少穩定 2 年,避免凍融。含 PBS 和 BSA 的凍干穩定。 |
分 子 量: | ~58.5kD |
等 電 點(diǎn): | 5.0 左右 |
抑 制 劑: | EDTA 、 EGTA 等 |
激 活 劑: | 0.1mM CoCl2 |
緩 沖 液: | 50mM PB-K, pH7.5, 0.1mM CoCl2, 0.1%NaN3 |
pH 穩定性: | 6.5-11.5(25℃, 24h) |
最 適 pH: | 11.0-11.2 |
最適溫度: | 20℃-60℃活力隨溫度升高逐漸升高; 37℃測值為 25℃測值的 3.3 倍。 |
熱穩定性: | 45℃以下穩定; 60℃ 加熱 30min 后活力依然保留 50%以上; 70℃ 以上失活。。 |
二、 酶活檢測方法
1. 原理
rALP 催化無(wú)色的對硝基苯磷酸二鈉水解生成淡黃色的對硝基苯酚,后者在 405nm 處有特征吸收
峰。通過(guò)測定 OD405 的變化速率計算 ALP 的活性。 1 個(gè)酶活單位等于在下述反應條件下每分鐘生成
1umol 對硝基苯酚所需的酶量。
2. 測活試劑
測活試劑為北京利德曼生化股份有限公司堿性磷酸酶測定試劑盒 (AMP 緩沖液, SFBC 速率法)。
R1:試劑盒中反應緩沖液(1M AMP, 0.5mM MgCl2, pH10.2);
R2:試劑盒中的反應底物(10mM pNpp);
樣品稀釋液: 30mM TEA(三乙醇胺), 1mM MgCl2, 0.1mM CoCl2, 5mg/ml BAS, 0.1%NaN3, pH7.6,
2-8℃保存。
3. 檢測步驟:參考堿性磷酸酶試劑盒說(shuō)明書(shū)
R1 1000ul
S 20ul
R2 200ul
R1+S+R2 混勻后,于 37℃溫育 60sec,測量之后 120sec 內 OD405的變化速率。
4. 檢測參數:
反應類(lèi)型 | SFBS 速率法 | 波長(cháng) | 405nm 或 410nm |
反應方向 | 升反應 | R1:S:R2 | 1000:20:200 |
F 值 | 3298 | 線(xiàn)性范圍 | 0~600U/L |
IVD原料