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堿性磷酸酶（高比活）
對硝基苯磷酸二鈉 + H2O —————→ 對硝基苯酚 + NaH2PO4
一、 產(chǎn)品介紹
| 外 觀(guān)： | 無(wú)色或淺紅色溶液 |
| 蛋白比活： | ≥2000U/mg protein。建議作為 ALP 質(zhì)控品或校準品，適合標記抗體。 |
| 純 度： | ≥95% by SDS-PAGE。 |
| 穩 定 性： | 2-8℃至少穩定 2 年，避免凍融。含 PBS 和 BSA 的凍干穩定。 |
| 分 子 量： | ~56kD |
| 等 電 點(diǎn)： | 4.62 左右 |
| 抑 制 劑： | EDTA 、 EGTA 等。 |
| 激 活 劑： | 0.1mM CoCl2 |
| 緩 沖 液： | 50mM PB-K， 1mM MgCl2， 0.1mM CoCl2， 0.1%NaN3， pH7.5。 |
| pH 穩定性： | 6.5-11.5（25℃， 24h） |
| 最 適 pH： | 11.0-11.2 |
| 最適溫度： | 20℃-60℃活力隨溫度升高逐漸升高； 37℃測值為 25℃測值的 3.3 倍。 |
| 熱穩定性： | 45℃以下穩定； 60℃ 加熱30min后活力依然保留50%以上； 70℃ 以上失活。 |
二、 酶活檢測方法
1. 原理
ALP 催化無(wú)色的對硝基苯磷酸二鈉水解生成淡黃色的對硝基苯酚，后者在 405nm 處有特征吸收峰。
通過(guò)測定 OD405的變化速率計算 ALP 的活性。 1 個(gè)酶活單位等于在下述反應條件下每分鐘生成 1umol
對硝基苯酚所需的酶量。
2. 測活試劑
測活試劑為北京利德曼生化股份有限公司堿性磷酸酶測定試劑盒 (AMP 緩沖液， SFBC 速率法)。
R1：試劑盒中反應緩沖液(1M AMP， 0.5mM MgCl2， pH10.2)；
R2：試劑盒中的反應底物（10mM pNpp）；
樣品稀釋液： 30mM TEA(三乙醇胺)， 1mM MgCl2， 0.1mM CoCl2， 5mg/ml BAS， 0.1%NaN3， pH7.6，
2-8℃保存。
3. 檢測步驟：參考堿性磷酸酶試劑盒說(shuō)明書(shū)
R1 1000ul
S 20ul
R2 200ul
R1+S+R2 混勻后，于 37℃溫育 60sec，測量之后 120sec 內 OD405的變化速率。
4. 檢測參數：
| 反應類(lèi)型 | SFBS 速率法 | 波長(cháng) | 405nm 或 410nm |
| 反應方向 | 升反應 | R1:S:R2 | 1000:20:200 |
| F 值 | 3298 | 線(xiàn)性范圍 | 0~600U/L |
三、 酶性質(zhì)
IVD原料